山茱萸新苷对过氧化氢诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的:探究中药山茱萸提取物山茱萸新苷对SH-SY5Y细胞生长的影响及对过氧化氢诱导SH-SY5Y细胞损伤的神经保护作用。方法:体外培养的SH-SY5Y细胞与山茱萸新苷(0.3、1、3μmol/L)作用2 h后,加入过氧化氢300μmol/L作用12 h诱导SH-SY5Y细胞产生氧化损伤。显微条件下观察细胞形态;CCK8法检测细胞存活率;分光光度计法测定LDH释放率;JC-1法检测线粒体膜电位;荧光显微镜检测胞内ROS水平;Hochest 33258和AO/EB染色法检测细胞凋亡情况;分光光度计检测胞内SOD活力、GSH水平和MDA含量。结果:山茱萸新苷在0.01μmol/L～30μmol/L条件下对正常SH-SY5Y细胞不产生毒性作用;与模型对照组相比,山茱萸新苷在0.3、1和3μmol/L条件下可呈浓度依赖性地提高细胞存活率,并明显改善细胞受损形态和凋亡水平;同时山茱萸新苷0.3、1、3μmol/L能降低LDH渗漏率并升高线粒体膜电位;此外,山茱萸新苷各浓度还能提高胞内抗氧化酶水平和GSH含量,减少丙二醛的产生,在浓度为1μmol/L时效果最佳,其抗氧化损伤效果与维生素E相当。结论:山茱萸新苷对正常SH-SY5Y细胞无毒性作用,且对过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有较好的保护作用,这可能与其降低细胞氧化损伤,抑制细胞凋亡相关。     

纳米晶胶原基骨与人骨髓间充质干细胞的复合培养

目的：观察人骨髓间充质干细胞与纳米晶胶原基骨的复合培养，证实纳米晶胶原基骨是否可以成为组织工程的良好载体材料。 方法：实验于2003—07／2004—08在清华大学材料科学与工程系完成纳米晶胶原基骨的制备及处理，在中日友好临床医学研究所免疫室完成纳米晶胶原基骨与骨髓间充质干细胞复合培养。健康自愿献髓者3人，在中日友好医院骨坏死与骨循环实验室体检。应用仿生原理制备纳米晶胶原基骨，体外培养骨髓间充质干细胞并与材料复合，通过共聚焦显微镜和环境扫描电镜观察骨髓间充质干细胞与材料的复合情况。 结果：①共聚焦显微镜显示：在各层面扫描骨髓间充质干细胞均深入纳米晶胶原基骨的内部孔隙。②环境扫描电镜显示：第2天细胞贴附在多孔材料上，在纳米晶胶原基骨底部靠近培养板处细胞黏附明显较纳米晶胶原基骨上其他部位多，细胞也开始伸展，伸出伪足向材料微孔中长入，孔隙内见不到桥接的细胞连接细胞在整个材料及孔隙内表面贴附、伸展。第7天时细胞在材料上完全铺展。伪足向材料微孔中长入，在部分直径较小的孔隙中（70～150μm），细胞之间突起相互连接呈桥状。纳米晶胶原基骨临近培养板的一面有较多细胞生长，主要在材料的表面和材料的裂隙中，孔隙中较少。第14天，大量细胞在纳米晶胶原基骨表面和孔隙中生长，尤以孔隙中明显。细胞之间广泛存在突起连接，在孔隙中呈网状互相相连。 结论：纳米晶胶原基骨是良好的组织工程支架材料，易与骨髓间充质干细胞复合．适合种子细胞的贴附、生长、增殖和分化。     

大鼠Uqcrfs1重组质粒的构建及其在HEK293T细胞中的表达

目的:构建大鼠Uqcrfs1的重组质粒并检测其在人胚胎肾293T细胞中的表达。方法:应用RT-PCR方法从大鼠肾脏组织总RNA中扩增出编码Uqcrfs1的cDNA,克隆至pUM-T载体并测序,然后亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His,酶切鉴定及测序正确后以磷酸钙共沉淀法瞬时转染HEK 293T细胞,使用RT-PCR、Western Blot方法检测重组质粒在转录及蛋白水平的表达。结果:测序结果证实PCR扩增得到编码Uqcrfs1的cDNA序列正确;磷酸钙共沉淀法转染HEK293T细胞后,在基因转录与蛋白表达水平,结果达到预期。结论:成功构建大鼠Uqcrfs1的重组质粒,该重组质粒可在HEK293T中过表达。     

高苯丙氨酸血症1 066例随访分析

【目的】 了解高苯丙氨酸血症(hyperphenylalaminemia, HPA)患者治疗随访及预后。 【方法】 对在本院诊断治疗的1 066例HPA的治疗随访结果进行回顾性分析。 【结果】 1)在1 066例HPA患儿中,共有1 016例为苯丙氨酸羟化酶缺乏症,即经典型苯丙酮尿症(phenylketonuria, PKU),50例为四氢生物蝶呤缺乏症(tetrahydrobiopterin deficiency, BH₄D)。在这些PKU患者中,有369例(34.62%)患儿在新生儿筛查时被确诊并在3个月内开始规律治疗,241例(22.61%)在生后3～12个月内确诊, 456例(42.78%)在1岁后才确诊。2)3个月内筛查治疗的患儿智力发育明显高于非筛查确诊的患儿(96±15, 69±11;t=14.19,P＜0.01﹚。3)3个月后才确诊的经治疗后智力水平也有明显提高﹙46±15,69±11,t=7.13,P＜0.05﹚。4)氢质子磁共振波谱(¹HMRS)检测22例HPA患儿的脑苯丙氨酸(phenylalanine, Phe)浓度表明患儿血、脑Phe浓度与智商均呈负相关关系(r_血=0.505,r_脑=0.647,P<0.01)。 【结论】 对所有HPA患者均应进行鉴别诊断,尽早确诊和治疗, 控制血、脑苯丙氨酸浓度是减少智能落后的有效措施。     

从糖肾方临床研究探讨中医药多中心RCT的关键问题

中医临床疗效的客观和科学评价是中医临床研究的重大难题。随机对照试验（randomized controlled trial,RCT）是目前评价药物有效性和安全性的金标准,符合CONSORT声明的高质量研究报告已经成为评价一项研究内部真实性和外在真实性的依据。     

血管内皮前体细胞在糖尿病足治疗中的应用

糖尿病是严重损害我国人口健康的主要疾病之一,糖代谢紊乱所引发的血管病变是导致糖尿病患者致残和致死的丰要原因。如何防治糖尿病血管病变所产生的并发症是糖尿病研究的热点课题。糖尿病足是糖尿病患者由于神经或血管病变导致足部缺血性坏死并合并感染的一种严重并发症。由于对其发生机制不完全明了,目前临床缺乏特异有效的治疗手段。     

老年肺血栓栓塞症的特点和临床诊治思路

老年人群是肺血栓栓塞症（PTE）的高危人群,有研究显示随着年龄增长,PTE的发病率呈现升高趋势,且老年PTE的病死率、复发率和出血发生率较年轻人明显升高。 因此,老年PTE作为一个重要的国际性医疗保健问题已引起各国普遍关注。在过去的20年间,老年PTE的诊断和治疗取得了很大进步,如新的诊断策略的建立（包括Wells评分和改良的Geneva评分）、年龄调整的D?二聚体界限值对于PTE的排除诊断价值、新型抗凝药物在老年患者中的应用等。本文我们主要针对老年PTE诊断治疗方面的最新进展进行了总结,以期对临床肺血管病医师有所帮助。     

P-糖蛋白抑制剂对两性霉素B血脑屏障转运的作用

目的 探讨P-糖蛋白抑制剂对两性霉素B(AmB)血脑屏障转运的影响.方法 应用小鼠脑血管内皮细胞建立体外血脑屏障模型,选取维拉帕米作为P-糖蛋白抑制剂,AmB作为受试底物,经细胞毒性实验选定合适的温育时间及药物浓度,分别进行不同时间点的AmB细胞摄取实验及不同维拉帕米浓度的AmB细胞摄取实验.组间均数比较采用单因素方差分析,均数两两比较采用Bonferroni检验.结果 AmB的血脑屏障转运随时间延长不断积累,与同一时间点对照组相比,抑制剂组在90 min(t=6.753,P=0.001)、120 min(t=3.574,P=0.016)、150 min(t=4.759,P=0.005)处AmB细胞摄取水平明显升高,其余时间点两组间差异无统计学意义.与阴性对照组相比,AmB细胞摄取水平在不同浓度维拉帕米组(2、5、10、50、75和100μmol/L)均有显著提高(P=0.000、0.014、0.000、0.014、0.000、0.000),且随维拉帕米浓度升高增加幅度更明显.结论 P-糖蛋白抑制剂维拉帕米可提高脑毛细血管内皮细胞对AmB的摄取作用,提示P-糖蛋白参与血脑屏障AmB的转运.     

Gasdermin B基因及其相关疾病的研究进展北大核心CSCD

人Gasdermin B(GSDMB)基因作为Gasdermin(GSDM)基因家族的一员,可能与哮喘、肿瘤以及免疫系统疾病的发生发展相关。最新研究发现由其编码的GSDMB蛋白介导了细胞焦亡,GSDMB蛋白可以在细胞毒性淋巴细胞释放的颗粒酶A(granzyme A,GZMA)的作用下裂解为GSDMB-N端结构域直接诱导细胞焦亡,亦可以通过结合半胱天冬氨酸酶-4(cysteinyl aspartate specific proteinase-4,caspase-4)促进Gasdermin D的裂解,从而间接促进细胞焦亡。本文综述了GSDMB基因参与的细胞焦亡的机制以及与之相关疾病的研究进展。     

牙髓干细胞的研究与进展

综合分析牙髓干细胞的研究现状及发展方向，以期更好地分离鉴定牙髓干细胞，提高牙髓干细胞的体外增殖活性。通过对入选文献进行分析整理，将牙髓干细胞从干细胞理论、牙髓干细胞概念、牙髓干细胞生物学特性及牙髓干细胞培养4方面进行分析。虽然目前对牙髓干细胞的生物学特性、培养方法及应用前景已有一定了解，但牙髓干细胞的体外培养扩增、鉴定和分子机制等问题尚未完全清楚，这对牙髓干细胞的应用起到决定性作用。牙髓组织取材容易，利用牙髓干细胞研究牙齿器官发育、牙髓损伤修复的分子机制，以期最终能寻找更好地解决牙髓组织损伤修复的治疗方法。